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液相色谱柱的选择及维护

时间:2018-09-29  编辑:上海气谱仪器字体:
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色谱柱的选择
 
液相色谱仪基质的选择大致遵循以下法则,硅胶基质的填料被用于大部分的HPLC分析,尤其是小分子量的被分析物,聚合物填料用于大分子量的被分析物质,主要用来制成分子排阻和离子交换柱。
 
色谱柱在使用前,最好进行柱的性能测试,并将结果保存起来,作为今后评价柱性能变化的参考。在做柱性能测试时要按照色谱柱出厂报告中的条件进行(出厂测试所使用的条件是最佳条件),只有这样,测得的结果才有可比性。但要注意:柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。
 


色谱柱的维护
 
一、 色谱柱的平衡
反相色谱柱由工厂测试后是保存在乙腈/水中的。新柱应先使用10-20倍柱体积的甲醇或乙腈冲洗色谱柱。请一定确保您分析样品所使用的流动相和乙腈/水互溶。每天用足够的时间以流动相来平衡色谱柱,您就会在处理问题方面获得最大的"补偿"。
 
二、色谱柱的再生
长期使用的色谱柱,往往柱效会下降(柱子的理论塔板数减低)。可以对色谱柱进行再生,在有条件的实验室应使用一个廉价的泵进行柱子的再生。建议用来冲洗柱子的溶剂体积。
 
三、 色谱柱的维护

 使用预柱保护分析柱(硅胶在极性流动相/离子性流动相中有一定的溶解度)

 大多数反相色谱柱的pH稳定范围是2-7.5,尽量不超过该色谱柱的pH范围

 避免流动相组成及极性的剧烈变化

 如果使用极性或离子性的缓冲溶液作流动相,应在实验完毕柱子冲洗干净,并保存于甲醇或乙腈中

 氯化物的溶剂对其有一定的腐蚀性,故使用时要注意,柱及连接管内不能长时间存留此类溶剂,以避免腐蚀。

 流动相使用前必须经脱气和过滤处理

 
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